Экспрессия маркёра апоптоза caspase-3 при токсическом гепатите, вызванном тетрахлорметаном

Введение. Несмотря на разностороннее изучение в последние годы механизмов токсических поражений печени, эффективных методов лечения до сих пор очень мало. При поражении печени тетрахлорметаном обнаруживается гибель гепатоцитов, в том числе и апоптоз.

Цель исследования – изучение гистологических изменений и иммуногистохимическое исследование экспрессии маркёра апоптоза caspase-3 на модели токсического поражения, вызванного тетрахлорметаном, при коррекции гепатопротекторами.

Материалы и методы. В эксперименте использовали 45 крыс, разделённых на 9 групп. В качестве токсиканта использовали масляный раствор CCl₄ для каждой группы крыс за исключением отрицательного контроля. Корректирующее воздействие на моделях острого поражения печени, вызванного однократным введением CCl₄, проводили с использованием препаратов «Гептор», «Мексидол» и оксиметилурацила. Коррекцию проводили дважды (вывод из эксперимента через 24 ч) и четырёхкратно (вывод из эксперимента через 72 ч). Ткани печени были подвергнуты стандартной гистологической обработке с окраской гематоксилин-эозином и иммуногистохимическому исследованию на caspase-3. Количество caspase-3-позитивных клеток оценивали с помощью предварительно обученной модели глубокого обучения YOLOv5.

Результаты. Через 24 ч интоксикации статистически значимых различий по количеству caspase-3-положительных клеток на микрофотографии в опытных группах не обнаружено (p = 0,087). Через 72 ч введения тетрахлорметана между группами были обнаружены статистически значимые различия (p = 0,02). Множественное сравнение показало присутствие статистически значимых различий между группами отрицательного контроля и положительного контроля (p = 0,0076), а также между группой положительного контроля и группой, скорректированной оксиметилурацилом (p = 0,0254).

Ограничения исследования. Ограничения исследования заключаются в оценке гистологических изменений и экспрессии маркёра апоптоза caspase-3 только через 24 и 72 ч после интоксикации без проведения долгосрочных исследований, в использовании относительно небольшого количества животных (45 крыс) и применении только стандартных гистологических методов, иммуногистохимического анализа и метода глубокого обучения.

Заключение. Через 72 ч группы положительного и отрицательного контроля отличались между собой, что указывает на усиление процессов апоптоза после введения тетрахлорметана, а группа с коррекцией оксиметилурацилом демонстрировала меньшее количество caspase-3-позитивных клеток по сравнению с группой положительного контроля, что свидетельствует о гепатопротекторном эффекте этого препарата.

Соблюдение этических стандартов. Исследование одобрено биоэтической комиссией ФБУН «Уфимский НИИ медицины труда и экологии человека», проведено в соответствии с Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях (ETS N 123), директивой Европейского парламента и Совета Европейского союза 2010/63/EC от 22.09.2010 г. о защите животных, использующихся для научных целей.

Участие авторов:
Байгильдин С.С. – сбор и обработка материала, написание текста;
Репина Э.Ф., Каримов Д.О. – концепция и дизайн исследования, редактирование;
Смолянкин Д.А., Хуснутдинова Н.Ю., Ахмадеев А.Р. – сбор и обработка материала;
Кудояров Э.Р., Валова Я.В. – сбор и обработка материала, статистическая обработка.
Все соавторы – утверждение окончательного варианта статьи, ответственность за целостность всех её частей.

Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов в связи с публикацией данной статьи.

Финансирование. Работа проведена за счёт средств субсидии на выполнение государственного задания в рамках отраслевой научно-исследовательской программы Роспотребнадзора «Гигиеническое научное обоснование минимизации рисков здоровью населения России» на 2016–2020 годы по теме 3.5, № гос. регистрации АААА-А16-116022610045-4. Синтез композиции 5-гидрокси-6-метилурацила выполнен в соответствии с планом научно-исследовательских работ УфИХ УФИЦ РАН (№ гос. регистрации АААА-А19-119011790021-4).

Поступила: 13.03.2024 / Поступила после доработки: 26.04.2024 / Принята к печати: 02.10.2024 / Опубликована: 07.03.2025